1 大肠感受态转化步骤

1. 感受态+连接产物，冰上静置20 min；
2. 42℃，热激90s；
3. +无抗LB 800μL；
4. 160 rpm 1h；
5. 超净台倒掉700μL，将剩余100 μL涂对应抗性的LB平板；
6. 37℃培养箱过夜。

2 农杆菌转化步骤

1. 感受态+质粒，冰上静置20min；
2. 液氮中5min；
3. 37℃水浴5min；
4. 加无抗LB800μL，180rpm 2h；
5. 8000rpm离心3min，弃上清，涂对应抗性LB平板；
6. 锡纸包裹，封口膜封口，42℃培养箱培养3-4d。

3 大肠杆菌感受态制备流程

1. 从-80℃中取出DH5α感受态，吸取5-10μL在LB平板划线37℃过夜培养；
2. 挑正常的单个菌落，接种至装有10mL液体LB的50mL管中，37℃，220rpm培养8-12h；
3. 按1:200的比例，转接于新的50mL LB中，37℃，200rpm培养2h左右（摇一个半小时左右注意观察），出现浑浊后，每隔30min测一次OD600,OD600为0.4-0.5时，停止培养；
4. 冰浴20min，4℃，5000rpm，5min，弃上清；再加冰浴20min的50mL菌液于4℃，5000rpm，5min，弃上清，控干多余液体；
5. 用20mL预冷的0.1 M CaCl2，轻轻悬浮细胞，冰浴10min，4℃，5000rpm，5min，弃上清；
6. 用30mL预冷的0.1 M CaCl2，轻轻悬浮细胞，冰浴30min，4℃，5000rpm，5min，弃上清；
7. 加3mL冰浴的0.1 M CaCl2 和1mL 5%甘油，小心悬浮细胞，即制成感受态细胞悬浮液；
   △混匀后分装于1.5mL管中，每管100μL，液氮速冻，-80℃保存。